Поиск

понедельник, 28 сентября 2015 г.

Выделение пастерелл серовара А от кроликов-пастереллоносителей

Pasteurella multocida
Pasteurella multocida - один из самых распространенных возбудителей инфекционных болезней кроликов. Многие авторы  указывают на широкое пастереллоносительство у данного вида животного, которое достигает 30-70 %.
Поэтому различные стрессовые факторы являются причиной вспышек пастереллеза без заноса возбудителя извне.
При оценке эпизоотической ситуации необходимо знать весь пейзаж микробов, циркулирующих в данном хозяйстве. Для этой цели был разработан метод выявления кроликов-пастереллоносителей с интраназальной инстиляцией водного раствора бриллиантгрюна, который является мощным стрессором для животных.
В литературе отсутствуют данные о влиянии глюкокортикоидов, которые вырабатываются надпочечниками на действие стрессоров, на течение пастереллезной инфекции у кроликов-пастереллоносителей.
Целью нашей работы является изучение влияния синтетического глюкокортикоидного гормона дексаметазона на течение спровоцированного пастереллеза и частоту выделяемости культур от кроликов-пастереллоносителей.
Материалы и методы. В эксперименте использовали 22 кролика возрастом 3 месяца, живой массой 1,5-1,7 кг. Для изучения биологических свойств выделенныхизолятов P.multocida использовано 24 беспородных белых мышей (живая масса 16-18 г).
Для выявления кроликов-пастереллоносителей использовали метод провокации инфекционного процесса (по Розанову Н.И., 1952). Для этого каждому кролику в обе носовые полости ежедневно в течение трех суток вводили по 0,2 см3 0,5 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого.
Выявленных кроликов-пастереллоносителей (8 голов) изолировали от здоровых животных и разделили на 2 группы по 4 головы в каждой. Животным первой группы провели дополнительную иммуносупрессию, для чего использовали дексаметазон. Данный препарат вводили внутримышечно в дозе 4 мг 2 раза в день в течение трех суток. Вторую группу животных не обрабатывали и использовали как контроль.
За кроликами вели наблюдение на протяжении трех суток. Ежесуточно проводили учет общеклинических показателей: частоту сердечніх сокращений (ЧСС), часто-ту дыхательных движений (ЧДД), ректальную температуру тела (Т).
По истечении срока наблюдений животных эутаназировали под общим нарко-зом (кетамин 100 мг + дроперидол 0,5 мг внутримышечно).
Для изоляции   P. multocida использовали биологический способ по В. И. Геведзе В.И (1989). Для этого кусочки легких  суспедировали (1:5) с 0,9% раствором натрия хлорида. Указанной суспензией в дозе 0,3 мл  заражали по 3 белые мыши (внутрибрюшинно). За  мышами наблюдали в течение 5 дней. Для изоляции чистой культуры P.multocida кровь из сердца агонирующих мышей сносили в мясо-пептонный бульон и инкубировали 24 часа.
Тинкториальные свойства изолятов P.multocida изучали путем окрашивания мазков крови из сердца павших мышей по Романовскому-Гимзе.
Суточные бульонные культуры окрашивали по Граму и Бурри-Гинсу.
Биохимические свойства изолятов P. multocida определяли согласно общепринятым методикам. Для определения способности P.multocida расщеплять сахара в качестве тест-объектов использовано ряд углеводов: сахарозу, глюкозу, мальтозу, арабинозу,лактозу,  галактозу,  трегалозу, ксилозу, инозит, рамнозу, салицин,  маннитол, дульцитол, сорбитол. Протеолитические свойства P. multocida  изучали тестами на выявление индола, сероводорода, ферментов каталазы и желатиназы.
Идентификацию изолятов P. multocida  осуществляли несерологическим методом типирования с помощью гиалуронидазы Staphilococcus aureus. С этой целью штрихом высевали суточную бульонную культуру P. multocida в чашки Петри на поверхность кровянного агара.  После чего перпендикулярно линиям первичного посева высевали 24-часовую бульонную культуру золотистого стафилококка. Чашки с посевами инкубировали в термостате при 37 С° в течение 24 часа и проводили учет роста культур.
Результаты исследований.
В результате провокации (22 головы) было выделено 8 (36,4 %) кроликов-пастереллоносителей. У указанных животных отмечали угнетение, снижение аппетита, серозно-катаральный конъюнктивит и двусторонний гнойный ринит.
Данные о динамике общеклинических показателей у обработанных и необработанных дексаметазоном кроликов отражены в таблице.
Из данных таблицы видно, что через 24 часа после введения гормона у кроли-ков-пастереллоносителей были отмечены незначительные сдвиги общеклинических показателей, которые проявлялись в виде умеренной тахикардии, тахипное, субфебрильной лихорадкой. В дальнейшем (42-72 часа) общее состояние обработанных дексаметазоном кроликов ухудшилось, что проявилось более выраженной тахикардией, тахипное, лихорадкой. Напротив, общее состояние необработанных дексаметазоном животных значительно улучшилось. Так, к концу срока наблюдений у 3 из 4 кроликовисчезли симтомы ринита и конъюнктивита; ЧСС, ЧДД и температура тела нормализовалась.
Таблица
Выявление кроликов-пастереллоносителей

  Из данных таблицы видно, что через 24 часа после введения гормона у кроли-ков-пастереллоносителей были отмечены незначительные сдвиги общеклинических показателей, которые проявлялись в виде умеренной тахикардии, тахипное, субфебрильном повышении температуры тела. В дальнейшем (42-72 часа) общее состояние обработанных дексаметазоном кроликов ухудшилось, что проявилось более выражен-ной тахикардией, тахипное, лихорадкой. Напротив, общее состояние необработанных дексаметазоном животных значительно улучшилось. Так, к концу срока наблюдений у 3 из 4 кроликов исчезли симтомы ринита и конъюнктивита; ЧСС, ЧДД и температура тела снизилась до нормальных показателей.
От кроликов-пастереллоносителей было выделено 5 культур микроорганизмов (4 культуры от обработанных и 1 культура от необработанных дексаметазоном кроли-ков). Изучаемые изоляты были представлены мелкими коккобактерирями, которые располагались в мазках одиночно, попарно,  короткими цепочками. В мазках крови из сердца мышей, окрашенных по Романовскому-Гимза, отмечена выраженная биполярность. В мазках, приготовленных из суточных бульонных культур кон-статировали мелкие грамотрицательные овоподобные палочки и  капсулу (окраска по Бурри-Гинсу).
Культуральные свойства изучали посевом расплодки бактерий на питательные среды. Культуры росли в S-форме (в МПБ вызывали легкую опалесценцию и феномен «муаровые волны» при встряхивании, на кровяном МПА – «росинчатый» рост). Изучаемый микроорганизм не вызывал гемолиза.
При изучении биохимических свойств культур установили , что они ферментирую глюкозу, декстрозу, сахарозу,  фруктозу, галактозу, маннозу до образования кислоты без газа. Не расщепляли лактозу, мальтозу, арабинозу, рамнозу, рафинозу; не расщепляли дульцит, салицин, инулин; не разжижали желатин. Все культуры были каталазо- и индолположительными.
На основании изучения  культуральных, тинкториальных и биохимических свойств выделенные изоляты были идентифицированы как P. multocida. В результате проведения типизации с использованием гиалуронидазы стаффилококка констатировали уменьшение размера и отсутствие флуоресценции колоний P. multocida, которые примыкали к линии роста золотистого стафилококка. Данное свойство характерно только для P. multocida серовара А.
Обсуждая полученные данные, необходимо отметить, что применение дексаметазона повышает частоту изоляции культур P. multocida у спровоцированных кроликов-пастереллоносителей. Однако, применение данного препарата приводит к более тяжелому течению пастереллеза, что затрудняет использование данного метода в производственных условиях.
 Интересно знать:



Комментариев нет:

Отправить комментарий